萬級無菌室容積小而嚴密，使用一段時間后，室內溫度很高，故應設置通氣窗。通氣窗應設在內室進門處的頂棚上（即離工作臺遠的位置）為雙層結構，外層為百葉窗，內層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內室使用后、自凈前開啟，以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機。萬級無菌室內設備和用具，無菌室內的工作臺，不論是什么材質、用途的，都要求表面光滑和臺面水平。在內室和外室各安裝一個紫外燈（多為30W）。內室的紫外線燈應安裝在經常工作的座位正上方，離地面2m，外室的紫外線燈可安裝在外室。外室應有的工作服、鞋、帽、口罩、盛有來蘇兒水的瓷盆和毛巾、手持噴霧器和5%石炭酸溶液等。內室應有酒精燈、常用接種工具、不銹鋼制的刀、剪、鑷子、70%的酒精棉球、工業酒精、載玻璃片、特種蠟筆、記錄本、鉛筆、標簽紙、膠水、廢物筐等。

    萬級無菌室的自凈消毒，薰蒸，這是無菌室*自凈的措施。無菌室使用了較長時間，污染比較嚴重時，應進行薰蒸自凈。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。噴霧：在每次使用無菌室前進行。噴霧可促使空氣中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微塵飛場，并有自凈作用。可用5%石炭酸噴霧。紫外線照射：在每次使用無菌室前進行。紫外線有較好的自凈效果。通常應開啟紫外線燈照射30～60min。無菌室工作規程，無菌室自凈。每次使用前開啟紫外線燈照射30min以上，或在使用前30min，對內外室用5%石炭酸噴霧。用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室換上已自凈的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。將各種需用物品搬進內室清點、就位，用5%石炭酸在工作臺面上方和操作員站位空間噴霧，返回外室，5～10min后再進內室工作。接種操作前，用70%酒精棉球擦手；進行無菌操作時，動作要輕緩，盡量減少空氣波動和地面揚塵。

    萬級無菌室工作中應注意安全，如遇棉塞著火，用手緊握或用濕布包裹熄滅，切勿用嘴吹，以免擴大燃燒；如遇有菌培養物灑落或打碎有菌容器時，應用浸潤5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸潤5%石炭酸的抹布擦拭臺面或地面，用酒精棉球擦手后再繼續操作。工作結束，立即將臺面收拾干凈，將不應在無菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無菌室后，對無菌室用5%石炭酸噴霧，或開紫外線燈照射30min。